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捕食应激诱发试验动物模型具有活动习性改动、警惕水平过高、惊慌行为、环境习惯才能变弱、躲藏躲避反响,以及空间学习和回忆才能受损的特色并且与PTSD具有类似的致病要素和进程。
捕食者应激设备的规划:设置1mX0.5mX0.4m大铁丝笼,放捕食者-猫;间隔大铁丝笼一侧15cm处固定一个19cmX13cmX12cm的小铁丝笼,以便在试验中将被捕食者-小鼠放入其间。小铁丝笼,选用网格尺度适宜的铁丝网,既能使猫较清楚的看到小鼠,又能较好的维护小鼠不遭到猫的损伤;小铁丝笼固定方位与大铁丝笼一端坚持必定间隔,可以使猫和小鼠从小铁丝上面和三个旁边面尽最大面积的可视。
试验进程中,猫可以挨近、嗅闻和抓咬小鼠,可是损伤不到小鼠,然后对小鼠形成单纯的心思应激。为了取得较好的应激作用,猫于试验条件前半天禁水禁食,试验完毕后回到正常状况饮水采食;为了尽可能坚持猫对小鼠应激的持续性选用四次换猫制,即每六小时换一次猫;为扫除饮水、采食的影响,整个试验进程中,小鼠可自在采食、饮水。
先将大鼠放入捕食应激试验箱的小笼中,再将一饥饿的猫放入试验箱中,使猫与大鼠无生理损伤性触摸10min后将猫取走。对照组大鼠(8只)除不触摸猫外,其它处理程序相同。应激大鼠随机分为模型组和干涉组中的不同剂量亚组(RU-L组、RU-M与RU-H组)每组各8只,给药剂量:RU-L组25mg/kg、RU-M组50mg/kg、RU-H组75mg/kg,于影响后当即腹腔注射给药。先将大鼠放入捕食应激试验箱的小笼中,再将1只饥饿的猫放入试验箱中,使猫与大鼠无生理损伤性触摸,致大鼠呈现细微惊慌性颤抖及因惊吓所造成的呼吸短促而快速鼻翼鼓动6~8min,以保证试验大鼠类似的应激强度及安稳的应激效应。正常对照组大鼠除不触摸猫外,其他处理程序相同。
于捕食应激后3、14、30天调查行为改动,并于3、10天调查空间学习和回忆才能的改动。①惊吓反响:调查动物承受重复、时刻短(1~2s)高频金属音影响后行为习性、自主活动及习惯才能的改动。②旷场活动性:将大鼠悄悄放入旷场行为调查箱中心小方格内,观测30s内动物的活动状况。计分规范:鼠二分之一以上的身体从地点方格进入相邻方格计1分,鼠后肢性站立计1分,二者相加为其所得总分数。③拒俘反响性:以动物从未触摸过的手套轻抓大鼠,调查其反响。记分规范0:很简单抓取动物;1:尖叫或躲避;2:尖叫并躲避;3:逃脱;4:逃脱并尖叫;5:咬或企图撕咬手套;6:自动跃起进犯。
第1、2天为空间定向条件反射练习。第l天练习9次,每次2min,记载动物从不同象限入水至发现并爬上渠道的时刻为练习潜伏期,每3次的均值作为1个调查单位。第2天重复进行6次练习。比较所得的5个调查单位练习潜伏期改动以剖析动物获取空间信息的才能,第3天进行空间觅向才能测验(probe trial):先将渠道移去,再将动物放入水中2min,记载它在4个象限中阻滞时刻的百分比,以判别动物回忆贮存及提取再现才能。
惊吓反响在时刻短高频金属音影响时,对照组鼠呈现1~3s的细微惊吓反射,在重复3次以上相同影响后很快习惯。模型组鼠在1月内,在遭到相同高频金属音影响时均呈现十分显着的惊吓反响,表现为全身性惊吓反射、反响起伏增大、保持的时刻长(5~10s),并呈现打洞、静心、趋暗性等多种躲藏和躲避性焦虑样行为(anxiety like behavior),且对影响的习惯时刻显着延伸,在重复影响6~10次后仍有较显着惊吓反响。干涉组中的RU-L与RU-M组大鼠与模型大鼠反响类似,而RU-H组大鼠两周后习惯惊吓。
于捕食应激后1,14d,1,2和4个月时别离取正常对照组及捕食应激组大鼠各12、15只,调查其情感行为改动:①大鼠运动活性:将大鼠悄悄放入旷场行为调查箱中心小方格内,观测5min内动物的活动状况。计分规范:大鼠1/2以上身体从地点方格进入相邻方格,即爬越1次计1分,所得总分用于点评其运动活性改动。②探究行为:办法同上,调查5min内大鼠后肢性站立计分改动。计分规范:后肢性站立1次计1分,总分用于点评其探究行为改动。③拒俘反响性:以动物从未触摸过的手套轻抓大鼠,调查其反响。记分规范:0很简单抓取动物;1尖叫或躲避;2尖叫并躲避;3逃脱;4逃脱并尖叫;5咬或企图撕咬手套;6自动跃起进犯;以此点评动物惊骇与抵触本质特征改动。④高架十字迷宫试验:将大鼠置于迷宫中心,头朝闭臂。别离记载5min内大鼠进入开臂和闭臂的次数和在两臂停留时刻(以四肢悉数入臂或出臂为准),核算大鼠进入开臂的次数和在开臂停留时刻别离占总次数(进入开臂与闭臂次数之和)及总时刻(在开臂与闭臂停留时刻之和)的百分比,以此为点评焦虑目标。急性应激15min的小鼠,5min内进入EPM敞开臂的时刻显着缩短,进入闭合臂的时刻显着延伸。这标明通过时刻短急性捕食者应激后小鼠的焦虑水平添加。应激小鼠进入敞开臂的次数及进入敞开臂次数占进入敞开臂和闭合臂次数之和的比率比对照组均显着削减。应激后小鼠进入敞开臂的时刻削减确实是由进入敞开臂的次数削减引起。这也标明晰应激15min后小鼠冒险行为削减,进一步证明捕食者应激模型确实可以使小鼠产生焦虑,导致心思应激产生。
别的,应激组小鼠其它行为学目标(即风险点评),比方静心、直立、抻腰等行为显着比对照组小鼠频频并且时刻也较对照组长,这也标明作者树立的捕食者应激可以使小鼠产生焦虑。
捕食者应激模型作为心思应激的抱负模型,具有其共同的优势:它不会直接引发痛苦影响(如电击足部),然后避免了躯体应激的产生;也不需要将测验者放到模仿及人工环境中(如捆绑管);别的,捕食者应激也不会对生理应战(免疫应激,出血,)反响引发反作用。
4.徐东宝,王杰,于燕妮,等.联合应激法树立单纯心思应激动物试验模型的研讨[J].重庆医科大学学报,2016,41(08):832-835.
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